Добрый день.

Не нашёл здесь такой темы: для чайника нужно описание подготовки образца крови для исследования в темном поле.
У меня куплено:
- микроскоп микромед 2 вар 3-20
- система визуализации ToupCam UCMOS 14 MP

Всё работает, картинка на компьютер выводится. Но не знаю как правильно работать:

- маленькую каплю крови "сажаю" на предметное стекло
- накрываю эту каплю покровным стеклом
- сверху капаю иммерсное масло
- опускаю оккуляр до соприкосновения с иммерсным маслом и ловлю резкость.

Так ?
Какие еще есть тонкости ?

В окуляр глазом смотрят

1. Микроскоп укомплектован конденсором тёмного поля? Или реализуется щелевой метод? Или в комплекте есть диафрагма с чёрным непрозрачным пятном посередине и светлым кольцом? Или есть объектив со встроенной ирисовой диафрагмой? Если этого нет, то метод тёмного поля не получится.
2. Если есть конденсор тёмного поля, то какой? Чтобы дать советы надо знать комплектацию микроскопа, в том числе маркировку объективов, конденсора.
3. Иммерсионное масло применяют только с объективами масляной иммерсии, на Вашем микроскопе это объектив большого увеличения 100х/1.25, если нет специального объектива 50х или 63х.

Если есть конденсор тёмного поля (лучше конденсор-кардиоид) и объектив масляной иммерсии для работы с покровным стеклом (на объективе указана маркировка - 0,17), то методика такова:
1. Настройка освещения по принципу Келера со светлопольным конденсором. Это важно для любых методов контрастирования.
2. Замена конденсора светлого поля на конденсор тёмного поля (если в комплекте есть такой) и его закрепление. Или установка в конденсор светлого поля тёмного диска для конкретного объектива.
3. Взять заранее обезжиренное стандартное предметное стекло (толщина 1,1 мм) и покровное стекло. Не рекомендую использовать стёкла китайского производства, в тёмном поле светятся все микроцарапинки и прочие дефекты...
4. Каплю крови разместить на середину предметного стекла, накрыть покровным (покровного стекло ставится на ребро, а затем скользящим движением опускается, чтобы между стёклами не было пузырьков воздуха).
5. На покровное стекло наносится капля иммерсионного масла и препарат устанавливаем в препаратодержатель.
6. Если конденсор тёмного поля - кардиоид, то опускаем конденсор, на верхнюю линзу конденсора можно нанести каплю иммерсионного масла или дистиллированной воды и поднять конденсор до соприкосновения с предметным стеклом и растеканием капли по стеклу.
7. Объектив масляной иммерсии 100х плавно опускаем в каплю масла с помощью рукоятки грубой фокусировки и настраиваем резкость с помощью микровинта.
8. Фон должен быть чёрным, если этого нет, то надо настраивать освещение и производить центрировку конденсора тёмного поля. Для этого поднимаем конденсор до появления светлого пятна (смотрим в окуляры). Если светлое пятно не посередине, то выводим это пятно в центр с помощью регулировочных винтов конденсора.
9. Правильность настройки проверяют с помощью дополнительного микроскопа типа МИР-4 или аналога или встроенной линзы Бертрана.

Благодарю за отлик.

Если не затруднит, еще вопросы:

1. Ставлю покровное стеклышко ребром на предметное, наклоняю его ... и все равно в конце оно падает на каплю и в результате у меня в центре образуется пузырёк. Что значит "накрывать скользящим движением" ?
2. От чего, иногда слой крови между стеклами получается слишком толстым ? Нужно-ли придавливать покровное стекло к предметному ?
3. Вижу, например вирус (кружек с колючками), а как он устроен, уже не вижу. Возможно ли добиться большего увеличения на моем "микромеде" ? Например докупить объектив *200 и установить его вместо более слабого объектива (они мне не нужны) ?
4. Использую программу видеозахвата, которая шла комплектом к микроскопу (Микролаб). Тормозная и не удобная программа. К тому-же 14 мегапиксельная камера, по размеру, дает картинку как 0,3 МПиксельная и не увеличивается. Какая программа видеозахвата больше подойдет для геммосканирования ?
5. Как помочь крови остаться подольше живой, чтобы эритроциты по-дольше не склеивались в столбики ? Подогревать предметное стекло ? Побольше капать крови и смотреть в самый центр ?

Вы не ответили на вопросы про маркировку объективов, конденсора...





Ребро покровного стекла ставите на край капли и затем плавно наклоняете покровное стекло, не отрывая его от предметного стекла и от капли.



"толстый слой" - это неравномерное распределение элементов крови. примените обычную методику:
1. Поместить небольшую каплю крови на предметное стекло вблизи полосы для записи. предметное стекло должно лежать горизонтально.
2. Взять другое предметное стекло и поместить его коротким ребром под углом 45° вблизи капли крови, наклонить так, чтобы вся кровь расплылась по стеклу.
3. Быстрым движением от капли проводят этим предметным стеклом по лежащему предметному стеклу. Не нажимайте сильно на стекло, иначе раздавите форменные элементы крови.
4. Этот тонкий слой крови можно накрыть покровным стеклом, если используете объективы для работы с покровным стеклом. Если объективы для работы без покровного стекла, то кровь не накрывают.

Лучше рассматривать окрашенный препарат.




В световой микроскоп Вы не рассмотрите вирусы Они слишком малы для светового микроскопа. Нижний предел разрешения светового микроскопа равен 0,18 мкм.
Видимо Вы увидели моноцит - один из форменных элементов крови. Почитайте для начала о форменных элементах крови.
Про какой объектив с увеличением 200х Вы пишите??? Не верьте тем, кто Вам будет говорить про увеличение светового микроскопа 2000х-2500х. Есть так называемое полезное увеличение микроскопа.
Для рассмотрения элементов крови хорошо используют объективы 50х, 60х, 63х, 90х, 100х.




Лично я не использую подобные китайские камеры...Считаю их игрушками для детей.

А зачем Вам всё это? Гемосканирование, как его подают сейчас, в большей степени шарлатанство...

Маркировка на конденсоре темного поля для меня не многословная: 2 фото приклеил. В руководстве на микроскоп сказано, что он «иммерсионный конденсор темного поля «1,36 – 1,25» с кольцевой числовой апертурой 1,36 – 1,25 (м.и.)»




Я из «озабоченных ЗОЖ-ников»: интересно увидеть, что во мне происходит после разной еды, спорта, голода, недосыпаний и т.д. Убедился в необоснованности высказываний и рецептов интернетных гуру. А тут как говорится лучше 1 раз увидеть. Я относительно здоровый человек, просто интересно мне всё это, как хобби стало.
Атлас крови посматриваю, тут вы правы, я – чайник.
В окуляры смотреть пробовал – сильный дискомфорт и видно плохо. Через камеру мне удобнее и потом могу записывать и сравнивать.
Засушенные, подкрашенные мазки крови наверное имеют свои преимущества, но мне интереснее смотреть на еще живую кровь и её обитателей.
Вопросы мои можно переформулировать:
1. как сделать картинку на компьютере по-подробнее ? по-качественнее ?
2. какие типовые ошибки исследователя приводят к остановке жизни в крови во время подготовки ? Кровь остывает, высыхает, окисляется и т.д. ? Может нужно каплю по-больше на стекло ложить ? и еще будет ли кровь другой (более живой), если колоть себя не в конец пальца, а, например, рядом веной, или на теле, поближе к сердцу ? … Тут не хочется изобретать велосипед методом тыка.

Спасибо за фото. По маркировке объективов, окуляров, конденсоров можно узнать многое. У Вас темнопольный высокоапертурный конденсор (если верить китайским производителям). Можно достигнуть числовой апертуры 1,25, но для этого на верхнюю линзу конденсора необходимо нанести каплю специального иммерсионного масла для микроскопии. После чего конденсор поднимаете до соприкосновения с предметным стеклом, на котором капля или мазок крови.
Если не наносить каплю иммерсионного масла на линзу конденсора, то апертура будет 0,90. Это для работы с объективами, не требующими применения масляной иммерсии. То есть, если Вы используете объектив 40x/0,65, то не надо использовать масло. Если используете объектив 90х/1,25 или 100х/1,25, то это высокоапертурные объективы, необходима масляная иммерсия, иначе картинка будет размыта. У этих объективов числовая апертура 1,25 (апертура указывается на объективе через дробь после увеличения).
Числовая апертура - это характеристика разрешающей способности.

Такой конденсор, как у Вас, требует правильной настройки освещения и хорошего осветителя. Я мало знаком с китайскими микроскопами, но из тех которые видел, у них слабоватое освещение, с объективом 40х уже плохо видна картинка...




Если это хобби, то я в личку напишу Вам ссылочку на форум любителей микроскопии, там также есть специалист по гистологии, он больше расскажет именно про изучение препаратов крови.
Я в микроскопии специализируюсь на многом, но не на изучении препаратов крови. Кровь изучал давно, ещё в студенческие годы.




На самом деле наши глаза - это лучший инструмент для просматривания препаратов. Чтобы не было дискомфорта, надо правильно настроить бинокулярную насадку. Есть методика настройки.




Павел, качество картинки в большей степени зависит от правильно настроенного освещения, чистоты оптики. Для теста лучше использовать какой-нибудь постоянный окрашенный препарат типа среза растения.
Если в объективах с таким препаратом картинка хорошая, то можно настраивать тёмное поле или смотреть кровь в светлом поле.
Картинка на компе может быть смазана, если нет парфокальности, то есть в окуляры Вы видите всё чётко, а на мониторе всё смазано. Это значит производители микроскопа или продавцы не позаботились о парфокальности, китайские микроскопы этим страдают... Вам приходится делать перефокусировку, а это уже искажения...
Возможно, что сама камера низкого качества...К сожалению, специальные хорошие камеры для микроскопии довольно дорогие...

Практически след в след иду по стопам автора данной темы (только микроскоп другой), соответственно натыкаюсь на те же вопросы. Интересы те же - все изучить, начиная с себя и своей крови Можно и мне ссылочку на форум любителей микроскопии в личку?